循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTCs）是指由實(shí)體腫瘤上脫落下來進(jìn)入血液或者淋巴系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞。CTCs數(shù)量與癌癥發(fā)展進(jìn)程和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1-3]。大量臨床研究表明，對(duì)CTCs數(shù)量進(jìn)行跟蹤監(jiān)控有助于癌癥早期診斷[4, 5]，預(yù)后判斷[6]和藥效評(píng)估[7, 8]。
圖1. CTCs示意圖
經(jīng)過大量的臨床研究，研究人員在許多惡性腫瘤（乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、前列腺癌等）中都發(fā)現(xiàn)了CTCs的存在。目前，臨床上對(duì)腫瘤的檢測(cè)有以下幾種常規(guī)方法：影像學(xué)診斷、內(nèi)窺鏡檢查和病理學(xué)診斷，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，CTC檢測(cè)有兩個(gè)明顯優(yōu)勢(shì)：（1）. CTCs檢測(cè)是非侵入式的，醫(yī)生或者研究人員只需要從患者體內(nèi)抽取少量的外周血（幾毫升左右），這一過程是無創(chuàng)的，而且也沒有任何副作用，同一患者能夠反復(fù)多次采集，不需要通過對(duì)患者進(jìn)行手術(shù)或者穿刺等方式來獲取組織切片。（2）. 由于現(xiàn)在影像學(xué)等檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和精度限制，CTCs能更快地發(fā)現(xiàn)腫瘤的動(dòng)態(tài)變化情況，有助于對(duì)腫瘤患者進(jìn)行預(yù)后判斷、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警和轉(zhuǎn)移情況監(jiān)控等。
目前，對(duì)CTCs的研究主要集中在早期篩查、輔助腫瘤分期、預(yù)后評(píng)估、個(gè)體化治療策略制定，療效及耐藥監(jiān)測(cè)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移預(yù)警等方面。
人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞差相富集試劑盒利用密度梯度離心法，從全血樣本中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），再通過偶聯(lián)了抗人CD45單克隆抗體的免疫磁珠去除腫瘤病人PBMC細(xì)胞中的CD45+細(xì)胞，從而有效的富集了病人外周血標(biāo)本的CTCs。本實(shí)驗(yàn)過程中紅細(xì)胞的去除避免了低滲裂解法的使用，從而對(duì)富集的腫瘤細(xì)胞損傷降到最低，使獲得的靶細(xì)胞維持了良好的自然狀態(tài)及細(xì)胞形態(tài)，可以應(yīng)用于后續(xù)一系列鑒定性研究。
免疫熒光細(xì)胞化學(xué)鑒定是通過Alexa Fluor 488熒光素標(biāo)記的細(xì)胞角蛋白抗體（Alexa Fluor 488-anti-CK18）、PE標(biāo)記的抗人CD45抗體（PE-anti-CD45）和DAPI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，CK18表達(dá)陽性，CD45 表達(dá)陰性（DAPI+/CK18+/CD45-）的細(xì)胞被鑒定為CTC。本試劑盒對(duì)目標(biāo)細(xì)胞特異性強(qiáng)、非常可靠的完成全血中CTC的鑒定。
水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)（品牌：百泰克，型號(hào)：CK4050），15ml離心管，磁力架（百泰克），移液器，采血管。
恒溫培養(yǎng)箱，烘箱，熒光顯微鏡，暗盒。
按照人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞差相富集試劑盒（品牌：百泰克，型號(hào)：CT1001/ CT1002）使用說明書操作。
按照人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞鑒定試劑盒（免疫熒光法）（品牌：百泰克，型號(hào)：CT2001/ CT2002）使用說明書操作。
進(jìn)行了6組重復(fù)試驗(yàn)，細(xì)胞去除率如下表所示（表1），平均值96.13%。
進(jìn)行了6組重復(fù)試驗(yàn)，CTC回收率如下表所示（表2），平均值75.63%。
熒光顯微鏡或激光共聚焦下進(jìn)行觀察并采集圖片，其中DAPI+/CK18+/CD45-的細(xì)胞即為CTC。
通過人外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞差相富集及鑒定試劑盒，可有限實(shí)現(xiàn)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的富集及鑒定，具有平均回收率高、富集效果好、方法操作簡便及成本低等特點(diǎn)。
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